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结核菌染色机规范化操作及改良的结核分枝杆菌安全抗酸染色法

作者:     来源:     发布时间:2016-05-16 20:36:58

结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色,若加温或延长染色时间使其着色后,再用3%盐酸酒精处理也不易脱色,经此染色后,结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色,而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。 50多年来,我国一直沿用并不断改进结核分枝杆菌的细菌 学涂片,细菌培养,药敏实验和菌型鉴定方法,自1998年以后,

1.1直接涂片法 在玻片背面靠左端的1,3处用记号笔编号,用专用竹签折 于玻片正面的靠右端2/3处中央均匀涂抹成10mmX20mm 圆形痰膜,待自然干燥后,以1m的距离在紫外线灯下照射,

1.2集菌涂片法 1.2.1漂浮集菌法取晨起深咳痰或收集24h 121,15rain高压灭菌,待冷却后,取约20ml 左右于体积为 lO0ml,口径约2cm的玻璃容器中,加入灭菌蒸馏水约30mI

1.2.2沉淀集菌法取晨起深咳痰或收集24h 121,15min高压灭菌,待冷却后,取5-10ml 盛于体积为 100ml的离心管中,加水至50ml,经6000~8000Win 的速度离 心20rain后,取沉淀物涂片,染色镜检.

2.2染色步骤 (3)让细流水自玻片左侧的1/3处轻轻冲洗(玻片稍倾斜), 2.3镜检与报告 抗酸分枝杆菌阴性(一):连续观察300个不同视野,未发现 抗酸分枝杆菌菌数():1-2条/300 视野(镜检300 抗酸分枝杆菌阳性(1+):3-9条/100 视野(镜检100 抗酸分枝杆菌阳性(2+):1-9条/10 视野(镜检l0 个视野 抗酸分枝杆菌阳性(3+):1~9条/每视野(镜检每个视野找 抗酸分枝杆菌阳性(4+):10条,每视野(镜检每个视野找 到抗酸分枝杆菌1O条以上). 抗酸分枝杆菌阴性(一):连续观察5O个不同视野,未发现 抗酸分枝杆菌阳性(报告抗酸菌数):1~9条/50 视野; 抗酸分枝杆菌阳性(1+):10~99条/50 视野; 抗酸分枝杆菌阳性(2+):1~9条,每视野; 抗酸分枝杆菌阳性(3+):10~99条,每视野; 抗酸分枝杆菌阳性(4+):100条/每视野. 以lm的距离照射30rain.

4.1染色液

4.2染色步骤 (1)首先于56’12电热恒温箱底层放一个大小适宜,并盛有 (3)将固定好的涂片放置于90rflm一次性无菌平皿中;

(5)取出涂片,让细流水自玻片左侧的1/3处轻轻冲洗,洗 细流水自玻片左侧的1/3处轻轻冲洗,洗去脱色液,

4.3改良安全抗酸染色法的优点 份,脓液13份,关节液7 共97份,采用改良安全抗酸染色法进行对比实验,结果阳性符 (3)简便,快速,省时(JJn热只需在56%保温4rain),无需特 染色法每人每小时最多只能染6张涂片的低工作效率.采用改 良安全抗酸染色法,借助一台电热恒温箱(rrd.BU.42一BS-II 层隔板),一个40era60era的搪瓷盘,每人每小时至少可染20 张涂片(2种方法均除去涂片制作及固定时间). 

 

通常我们都采用抗酸染色染结核分支杆菌,但多数都是胞外培养的或是痰检的。请问如果经巨噬细胞吞噬后,能否染上,我试了好多次,都染不上,即:如何染胞内结核杆菌。结核菌染色机请高手指教。

具体方法

采用粟氏FMMU6型拨片离心沉淀仪(50g,5-10min)、 多聚赖酸处理过的玻片收集0.5ml脑脊液中的白细胞,4%多聚甲醛固定15min,固定后用0.3% TritonX-100浸泡30min,石炭酸复红染色15mi,再用含有Triton的石碳酸复红染料染色,酸性酒精脱色3min/次共2次,美蓝复染5min,油镜下观片。

传统抗酸染色、结核杆菌培养及改良抗酸染色的敏感性比较(3种检验的特异度均为100%)结核菌染色机上机操作支持:

分组 传统抗酸染色 结核菌培养 改良抗酸染色

以患者为基准(29例) 8(27.0%) 29(100%) 29(100%)

以样本为基准(48人次) 8(16.7%) 35(72.9%) 48(100%)

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